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质粒构建如何选择载体
质粒构建如何选择载体
把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。
P.S. 基因工程所用的 vector 实际上是 DNA 分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的 DNA。
选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述 3 点：
1. 构建 DNA 重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
2. 载体的类型：
克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选质粒。
表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
对原核表达载体应该注意 3 点：选择合适的启动子及相应的受体菌；用于表达真核蛋白质时注意克服 4 个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
3. 载体 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。
选用质粒（常用）做载体的 4 点要求：
选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5 kb）→不易损坏，在**里面拷贝数也多（也有大载体）；
一般使用松弛型质粒在**里扩增不受约束，一般 10 个以上的拷贝，而严谨型质粒 < 10 个。
必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；
必需有易检测的标记，多是***的抗性基因，不特指多位 Ampr（试一试）。
无论选用哪种载体，都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体 DNA 进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。
