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免疫磁珠标记及分选方法

免疫磁珠免疫磁珠(Immunomagnetic bead, IMB) 简称磁珠,免疫磁珠由载体微球和免疫配基结合而成。免疫磁珠的大小和形状的均一性,可使靶细胞迅速和有效地结合到磁珠上;它的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非特异性结合;超顺磁性可使磁珠置于磁场时,显示其磁性,从磁场移出时,磁性消除,磁珠分散;保护性壳可防止金属颗粒漏出。

将磁珠按磁珠功能基结合的蛋白质不同分为: 包被一抗的磁珠、包被二抗的磁珠、未包被的磁珠和包被抗生物素的磁珠。并针对不同抗原制出包被相应抗体的试剂盒,方便了使用。

免疫磁珠的主要特点有: 分离速度快、效率高、可重复性好; 操作简单、不需要昂贵的仪器设备;不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能

免疫磁珠标记方法 1直接磁珠和直接标记法:通过物理吸附和共价键结合直接将特意性抗体与磁珠耦合,然后再与相应细胞结合,形成细胞-抗原-抗体-磁珠复合物,在外磁场下直接分离目的细胞。快速、简单、特异性和细胞得率高,灵敏度低,需制备相应的偶联抗体磁珠。2间接磁珠和间接标记法:使用anti-lg等与磁珠偶联,通过Anti-lg再使磁珠与二抗体偶联,分离细胞时,先使细胞与一抗特异性结合,然后在与一抗标记磁珠结合,形成细胞-1抗-2抗-anti-lg-磁珠复合体,在外磁场下分离目的细胞的方法。该法增加了细胞的洗涤步骤,特异性也会降低。该法一般用于①没有直标磁珠抗体②需用几种抗体去除多种细胞③目的细胞上特异性抗原分子表达水平低。

免疫磁珠分选方法 阳性分选:运用特异性抗体偶联磁珠直接从细胞混合物中分离目的细胞的分选方法称为positive selection.阳性分选中磁珠标记的细胞即为目的细胞。该法简单、快速、细胞得率和纯度较高。如采用anti-CD14磁珠分选CD14+巨噬细胞。阴性分选:用抗体偶联磁珠去除无关细胞,使目的细胞得以纯化和分离的分选方法称为negative selection.阴性分选中磁珠标记的细胞为非目的细胞。如分离CD4+T细胞时,由于没有专用的CD4+T细胞分选磁珠,可通过anti-CD8、anti-B220、anti-CD49b、anti-CD11b、anti-Ter119标记磁珠去除CD8+T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞、巨噬细胞、粒细胞等,最终而获得较纯的CD4+T细胞。因此阴性分选法适用于:①从细胞混合物中去除某种类型细胞。

如肿瘤细胞。②缺乏针对目的细胞筛选的特异性抗体磁珠时。③抗体和目的细胞结合可能诱导细胞活化,影响后续细胞功能分析时。复合分选:将阴性分选和阳性分选相结合的分选方法。当目的细胞含量特别低,无法直接进行阳性分选时,可采用阴性分选发先出去其他杂细胞,当目的细胞富集到一定程度时在采用阳性分选发筛选目的细胞。

免疫磁珠分离技术的优点是:分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单,不需昂贵仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等,从而在微生物检测方面具有很大的优势。缺点:免疫磁珠敏感性不高,易于其他杂菌交叉反应,价格昂贵,应用受到一定限制。

免疫磁珠分离技术的发展方向:高敏感性磁珠的制造技术,降低磁珠生产成本,免疫磁珠与其它检测手段联用技术,免疫磁珠技术应用技术,总的来说,免疫磁珠分离技术未来将在生物医学、食品、农业科研、新药开发等领域具有更加广泛的发展前景。

 

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