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详细内容

透射电镜制样及取材方法

透射电镜制样流程:

1.取样

因戊二醛和锇酸的固定深度有限,样品越小越好,尽量取1mm*1mm*1mm。

2.先固定戊二醛在3%-6%。

参考:25%戊二醛(必须买Sigma公司的G5885或者更高浓度的戊二醛)和0.2M PBS

配置为戊二醛5%和0.1M PBS缓冲液的混合工作液;时间:常温4小时后,4度冰箱过

夜。

3. 清洗

PBS缓冲液冲洗。一定要洗干净,否则戊二醛和锇酸会产生沉淀。参考:每15-30

分钟更换一次,共4次。

4.后固定

参考:锇酸2%,固定4小时。剧毒,在通风橱操作。

5.清洗

PBS缓冲液冲洗。

6.梯度脱水

参考:乙醇梯度脱水:30-50-70-90-95-100-100%,每次10-15分钟,无水乙醇中加分子筛

或者无水硫酸铜,提前一周配置好备用。

7.渗透

参考:spurr树脂。包埋板即可。

8.包埋聚合

参考:70度,24小时。

10.超薄切片

11.染色(1)醋酸双氧铀封口膜上染色,染色时间参考:10分钟(铀染);(2)水清洗;

(3)柠檬酸铅因其极易和空气产生铅沉淀,染色时旁边放NaOH颗粒,注意避光。

组织和器官取材方法: 事先准备好所需的器械和固定液,并把它放4℃冰箱内预冷备用。如为穿刺物(肾组织、肝组织、脾组织等)、剪取物(胃镜剪取物、支气管镜剪取物、肠镜剪取物等)、手术切除物(肿瘤组织以及实验动物脏器等),均应在离体后迅速用生理盐水冲洗后或直接投入预冷的2.5%戊二醛固定液(保质期为1个月)内,并把它放4℃冰箱内保存,一般要求在两分钟内完成。

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