主营产品:
动物实验动物实验外包科研实验外包上海动物实验水迷宫实验外包动物实验外包公司动物造模动物模型构建动物行为学实验细胞实验细胞实验外包细胞培养实验细胞周期实验细胞增殖检测细胞凋亡检测
产品与服务

上海达为科生物科技有限公司

电话:021-55130726

传真:021-55130728

联系人:张艳

电话:18017844061

邮箱:jierdun@jrdbio.com

地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B638室  



详细内容

**共沉淀的具体注意事项介绍

上海达为科生物科技(上海)有限公司,专业提供**共沉淀技术,以下分享的是**共沉淀技术的具体注意事项介绍:

注意的问题:

(1)细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2%SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂。

(2)使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。

(3)使用对照抗体:

单克隆抗体:正常小鼠的IgG或另一类单抗

兔多克隆抗体:正常兔IgG

在**共沉淀实验中要实验结果的真实性,应注意以下几点:

(1)共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白,单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生。

(2)要抗体的特异性,即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀。

(3)确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的,这需要进行蛋白质的定位来确定。

原理:

当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x的抗体**沉淀x,那么与x在体内结合的蛋白质y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

优点:

(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;

(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;

(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

缺点:

(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;

(3)在实验前预测目的蛋白是什么,以选择后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。





Copyright@ 2003-2020  上海达为科生物科技有限公司版权所有      电话:0756-2183150 传真: 地址: 邮编:
         沪ICP备15041491号     

沪公网安备 31011302004470号