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上海达为科生物免疫组化非特异性染色及控制方法

上海达为科生物**组化非特异性染色及控制方法

一、非特异性染色的识别

常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不佳的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。

二、非特异性染色的原因

1. Ig与Fc受体结合

多见于冰冻切片(特别是**造血组织,**细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二抗反应,因为一抗一般稀释度均较大,因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体,所以石蜡切片不多见。

避免方法:

1)用以二抗相同种族的正常血清封闭切片;

2)用不含Fc段的抗体,但价格贵。(V区,C1区不含Fc段,用Pepsin消化)

2. 静电吸附

抗体是一种带负电荷的球蛋白,容易和带正电荷的组织相结合,如胶原纤维。

避免方法:

1)尽量稀释一抗;

2)降低抗体的电荷,如用2.5%NaCl0.05mTBS代替PBS

3)用去垢剂如triton-100Tween-20等处理切片。

3. 二抗与组织中的Ig结合

如羊抗兔的二抗,二抗可以标本中(人)Ig发生交叉反应,科学上越接近的动物,交叉反应越明显,如人与猴,兔与豚鼠。

避免方法:用与待测组织相同的5%的正常血清稀释二抗。如人血清。

4. 组织中残存醛基与Ig的结合

如醛类固定后未能的冲洗,残留醛基可以和Ig结合。

避免方法:

1)冲洗

20.02%的新鲜的硼氧化钾液处理10分钟后冲洗。

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