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RT-PCR、QPCR、Real-time PCR、Real-time RT-PCR 如何区分

将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR 区分,并不是轻而易举的事情。就算选择实验外包,自身也要清楚。

什么是 RT-PCR?RT-PCR 就是逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录 PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在 RT-PCR 中,一条 RNA 链被逆转录成为互补 DNA,再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。


那什么是 qPCR、Real-time-PCR?其实 Rea-time-PCR 和 qPCR(Quantitative Rea-time-PCR)是一码事,都是实时定量 PCR,指的是 PCR 过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行的分析。


虽然 Real-time PCR(实时荧光定量 PCR)和 Reverse transcription PCR(反转录 PCR)看起来都可以缩写为 RT-PCR,但是,上的约定俗成的是:RT-PCR 特指反转录 PCR,而 Real-time PCR 一般缩写为 qPCR(quantitative real-time PCR)。


那什么是 real-time RT-PCR(或 RT-qPCR)?real-time RT-PCR 中间的「RT」是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA 或 总 RNA 为模板的实时逆转录 PCR 技术(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的组合,是说将 mRNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析,因为 RT-PCR 是可以定性的,但不能进行定量检测的。


所以不难理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR)就是结合了荧光定量技术的反转录 PCR:先从 RNA 反转录得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR 进行定量分析(qPCR)。所以,实时荧光定量 PCR,它不仅可以用 cDNA 作为模板,也可以用基因组 DNA 等作为模板。

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