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详细内容

小鼠肝细胞原代培养

小鼠肝细胞原代培养实验方法原理 

将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 

 

小鼠肝细胞原代培养实验材料 

小鼠 

试剂、试剂盒     

DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS 

仪器、耗材 饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器

 

小鼠肝细胞原代培养实验步骤 

一、实验材料准备 

1.动物:小鼠。 

2.试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS 

3.器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。 

4.准备:酒精擦拭台面后把物品摆放好,开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。 

二、方法 

1.将小鼠断颈致死,置75%酒精泡2-3秒钟,取肝脏,置于盛有PBS的平皿中。 

2.剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有PBS液的平皿中。 

3.用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1 000 rpm5 min) 

4.视组织或细胞量加入5-6(3-5 ml)胰酶,37℃中消化20分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。 

5.加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。 

6.用100目孔径滤网滤过,除去未消化的大组织块。 

7.再次离心5 min,弃上清液。 

8.加入无血清培养液5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。 

9.加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量),血球计数板计数。 

 

注意事项:

小鼠肝细胞原代培养在细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以小鼠肝细胞无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。

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