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细胞迁移实验注意事项

细胞迁移实验的注意事项

1)根据待测细胞体积大小选择合适孔径的ThinCert。常用的为8.0-μm孔径

(如AGS细胞),如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径;

2)根据待测细胞迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well 

ThinCert接种细胞数约为2≈5×104/well,迁移时间12≈36小时;

3)由于Greiner公司的24-Transwell内含24个独立的ThinCert,为了避免

操作污染,每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板(Greiner);

4)如果细胞迁移能力较弱,下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的

上清加50μg/ml FNFibronectin),具体可查阅相关文献;

5)细胞悬液加入膜中央,尽量液面水平;

6)固定染色擦洗时动作小心,避免擦去膜底面的细胞。但要充分擦净膜

表面上未迁移的细胞,以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊

子**湿棉花擦洗,但要小心避免将膜戳破;

7Chamber和膜上都无法标记,操作时应小心避免混淆实验组和对照组;

8)充分晾干,避免残留水分导致镜下聚焦不一致。

细胞侵袭实验(cell invasion assay

实验材料

1Matrigel (BD 5mg/ml)-20℃保存

2)其余材料同迁移实验

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