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如何选择PBS的清洗方式、次数和时间?

1、单独冲洗,防止交叉反应造成污染:

每天检测的病例很多,所用的抗体种类及项目也多,如果在加入一抗孵育完后,将它们在一个缸内洗,这样就会造成交叉污染,影响后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗,冲洗的 PBS 为一次性,切片没有相互交叉污染的机会。

2、温柔冲洗,防止切片的脱落:

冲洗切片,取出切片,将 PBS 从上轻轻地冲洗,让 PBS 自上而下流下来,不要拿起切片将 PBS 对准切片冲洗,这样由于冲出的 PBS 有的冲击力,很容易使切片周边引起松动,导致切片的脱落。

3、冲洗的时间要足够,才能洗去结合的物质:

冲洗切片有人提出用微振荡器振染,振下未结合的各种物,使之不产生背景,此种做法一是浪费时间,二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为,用一小烧杯柔和地于切片上冲洗,就能冲洗去未结合的物质,无需附加其它条件,冲洗好于切片上再注入 PBS,持续 2 min 左右就足够了。

4、PBS pH 和离子强度的使用和要求:

业内人士曾指出:中性及弱硷性条件(pH7-8)有利于**复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于**复合物的形成,而高离子强度则有利于分解。我们目前常用的 PBS pH 7.4-7.6 ,浓度是 0.01 M,根据本室十几年来的使用情况,认为该溶液价格便宜配制方面,使用效果好。

5、常用试剂的配制和使用:

在**组织化学的染色过程中,用得多的试剂就是缓冲液,因为切片在整个染色中,抗体的加、换、切片的冲洗,DAB 的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用,缓冲液的过酸或偏碱,都将影响染色的结果。

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