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免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤
日期：2025-05-02 02:29
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摘要：
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤:实验材料：蛋白质
试剂、试剂盒：RIPA Buffer PBS Protein A agarose 琼脂糖 还有考马斯亮蓝染色液
仪器、耗材： 离心机 摇床 EP管 细胞刮子 离心管 培养板 电泳仪 电泳槽 高效液相色谱仪
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤：实验步骤
一、试剂准备
1.预冷PBS，RIPA Buffer，细胞刮子（用保鲜膜包好后，埋冰下），离心机。
2.用预冷的PBS洗涤两次细胞，终一次吸干PBS。
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免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤:实验材料：蛋白质
试剂、试剂盒：RIPA Buffer PBS Protein A agarose 琼脂糖 还有考马斯亮蓝染色液
仪器、耗材： 离心机 摇床 EP管 细胞刮子 离心管 培养板 电泳仪 电泳槽 高效液相色谱仪
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤：实验步骤
一、试剂准备
1.预冷PBS，RIPA Buffer，细胞刮子（用保鲜膜包好后，埋冰下），离心机。
2.用预冷的PBS洗涤两次细胞，终一次吸干PBS。
3.加入预冷的RIPA Buffer(1 ml/107个细胞、10 cm培养皿或150 cm2培养瓶，0.5 ml/5×106个细胞、6 cm培养皿、75 cm2培养瓶）。
4.用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5EP管中，4℃，缓慢晃动15 min（EP管插冰上，置水平摇床上）。
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤其原理是：当细胞在不是变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的很多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保存了下来。比如用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的proreinA就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
