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原代细胞鉴定技术
原代细胞鉴定技术
上海达为科生物科技有限公司，位于上海长江软件园，主要致力于免疫学、分子生物学、病理、病理分子生物、代谢组学，生物化学技术的科研中的应用和推广，专业从事相关专业的引进，服务和研发。上海达为科生物，主营实验技术服务，动物实验，细胞实验更是业内权威，原点细胞鉴定技术更是不断发展。
动物组织是由多种类型的细胞组成的，包括表皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞等。分离出的细胞是否是实验所需类型的细胞则需要进行鉴定，除了基本的形态学观察外常用的就是免疫组织化学检测。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育隔夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
随时生物技术和科技的日益发展，相信通过上海达为科全体员工的努力，原代细胞鉴定技术也会得到快速的发展，如果您对我们的产品感兴趣，我相信我们的服务让您满意放心！
