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冻存、复苏细胞的办法和注意事项
冻存、复苏细胞的办法和注意事项
上海达为科生物主营实验技术服务，以下分享的是冻存、复苏细胞的办法和注意事项 ，同时我们还提供各种细胞实验（复苏，技术支持等）。
冻存、复苏细胞的办法和注意事项之细胞冻存：
1. 时机不会：
细胞状况不好（长的太过了，培养液现已很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超越二个月，细胞性状已有改动改动）
佳机遇：细胞增殖旺盛，状况安稳，实验作用杰出，复苏后两周内
2. 细胞太少：
冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）
离心后调整细胞浓度。（不要从头洗细胞）
3. 盖子不紧：
冻存管的盖子要拧紧，不然复苏水浴时会渗水，构成污染。
挑选原配的管子和盖子
4. 单薄的冻存盒：
放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。
挑选厚壁泡沫塑料盒，或塞入很多干棉花。（冻存的原则：缓降！）
5. -80度太久：
放在－80度冰箱的时刻超越半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）
赶快转入液氮。
6. 液氮缺乏：
液面不能漫过一切细胞。
定期丈量液氮储藏，细胞悉数浸在液面下。
7. 取错细胞：
找不到/拿错冻存管。
每支冻存管都标上细胞的称号，冻存时刻，并记载在册本来，只需冻存作业完成的好，复苏大多没有艰难，可是要有耐性。
冻存、复苏细胞的办法和注意事项之复苏细胞：
1. 取错细胞：
拿错冻存管。（快快快，匆忙当中，难免犯错，何况－170多度，冻手！）
核对记载册及冻存管上细胞的称号、时刻是不是共同。
拿细胞时戴手套！
2. 水浴时刻太长：
2min还没消融。（冻存管的壁较厚，隔热）
恰当进步水浴温度（37度－40度）
要是冬季，就选用保温盒。
3. 冰盒内时刻太长：
复苏1h后，还没有加入新的培养液。（高浓度DMSO避免胞内构成冰晶，冻存时维护细胞，但复苏融解后，浸泡时刻太久会，对细胞有毒性）
提早预定超净台，削减复苏后插在冰盒里等候的时刻。
4. 失掉耐性：
复苏三四天后，细胞没有动静，以为失败，倒掉一切细胞。（有些细胞复苏后一星期，才有起色）
不要换液，耐性等候，两周后再做决议。
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