智启医学新维度
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简单介绍:
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1. 模型定义与构建策略
cPM(Cardiac-specific Pathological Model)小鼠模型通过心脏特异性启动子驱动目标基因的表达或敲除,模拟人类心脏疾病。主要构建策略包括:
- 启动子选择:常用αMHC(Myh6)或cTnT(Tnnt2)启动子,前者在成年心肌细胞特异性表达,后者在胚胎期和成年期均高表达。
- 基因操作方式:包括过表达模型(连接心脏启动子与目标基因)、条件性敲除(cKO,需结合Cre-loxP系统)和条件性激活(如Tet-on/off系统)。
2. 技术流程与验证
- 载体构建:克隆心脏启动子片段(如αMHC 5.5 kb),插入目标基因或sgRNA(用于CRISPR编辑),并添加报告基因(如GFP)。
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品系生成:
- 转基因小鼠:显微注射载体至受精卵原核。
- 基因敲除/敲入:通过CRISPR-Cas9或ES细胞打靶。
- 条件性模型:需先获得floxed小鼠,再与心脏特异性Cre小鼠交配。
- 验证方法:基因型鉴定(PCR/测序)、表达验证(qRT-PCR/Western blot)、功能评估(超声心动图、组织病理学)