智启医学新维度
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产品详情
简单介绍：
详情介绍：
一、技术原理与分类
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常规基因敲除（KO）
- 原理：通过CRISPR-Cas9或ES细胞打靶技术完全删除目标基因，导致其功能丧失。CRISPR-Cas9利用gRNA引导Cas9核酸酶切割DNA，通过NHEJ修复引入移码突变实现敲除。
- 特点：适用于研究基因的全身性功能，但可能导致胚胎致死或严重发育缺陷。
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条件性基因敲除（CKO）
- 原理：基于Cre-loxP系统，将loxP位点插入目标基因两侧，通过与组织特异性Cre小鼠杂交实现时空特异性敲除。
- 优势：避免全身性敲除的副作用，如研究心脏特异性敲除p53基因对心肌病的影响。
二、构建流程（以CRISPR-Cas9为例）
- 设计编辑试剂：优化gRNA序列以减少脱靶效应，并通过细胞实验验证效率。
- 胚胎操作：将Cas9/gRNA复合物显微注射或电穿孔至小鼠受精卵，编辑后的胚胎移植至假孕母鼠。
- 基因型鉴定：通过PCR或测序筛选携带突变的F0代小鼠，进一步繁育获得纯合子。
- 表型分析：包括生理指标、组织病理学及行为学评估。
三、应用场景
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疾病机制研究
- 代谢疾病：Leptin基因敲除小鼠模拟肥胖和糖尿病。
- 神经退行性疾病：Tau蛋白敲除小鼠研究阿尔茨海默病。
- 药物开发：用于靶点验证和药效评估，如PD-1敲除小鼠测试免疫疗法。
- 基础研究：解析基因功能，如Hox基因家族对胚胎发育的影响。
四、前沿进展与挑战
- 线粒体基因编辑：新型碱基编辑器（如DdCBE）可构建线粒体tRNA突变小鼠模型，模拟人类线粒体肾病。
- 伦理与优化：需遵循“3R原则”，并通过类器官模型（如axioloid）部分替代动物实验
