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MTT 实验全称为噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)比色法实验。
一、实验原理
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在特定波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
二、实验步骤
1. 细胞培养:将细胞接种于 96 孔板中,在适宜的条件下培养一段时间,使其贴壁生长。
2. 加 MTT 溶液:向每孔加入适量的 MTT 溶液,继续培养一定时间。
3. 终止培养:小心吸去孔内培养液,加入 DMSO 溶解甲臜。
4. 测定吸光度:使用酶标仪在特定波长处测定各孔的吸光度值。
三、实验注意事项
1. 细胞接种密度要适宜,避免过密或过疏影响结果。
2. MTT 溶液的加入量要准确,且要避免产生气泡。
3. 溶解甲臜时要充分振荡,确保甲臜完全溶解。
4. 测定吸光度时要选择合适的波长,并确保仪器的准确性。
四、应用领域
1. 细胞增殖和细胞毒性研究:通过比较不同处理条件下细胞的吸光度值,判断细胞的增殖情况或药物等对细胞的毒性作用。
2. 抗肿瘤药物筛选:评估抗肿瘤药物对肿瘤细胞的抑制效果。
3. 细胞生物学和药理学研究:为研究细胞生长、分化、死亡等过程提供重要的定量数据。