智启医学新维度
服务电话: 180-1784-7121(微信同号)
产品详情
简单介绍:
详情介绍:
细胞瞬转,即细胞瞬时转染,是指将外源核酸导入细胞内,使其在短时间内表达目的蛋白,但不会随着细胞分裂而遗传给子代细胞。
一、瞬转的原理
通过化学试剂(如脂质体等)或物理方法(如电穿孔等)将含有目的基因的质粒等载体导入细胞中。在细胞内,载体上的目的基因借助细胞的转录和翻译机制,合成相应的蛋白质。
二、瞬转的特点
1. 快速:转染后通常在几小时到几天内就可以检测到目的蛋白的表达。
2. 简单:操作相对简便,不需要复杂的筛选和稳定细胞系构建过程。
3. 灵活性高:可以快速测试不同的质粒构建体、启动子和调控元件的效果。
三、瞬转的步骤
1. 细胞准备:选择合适的细胞系,在适宜的培养条件下进行细胞培养,使其处于良好的生长状态。
2. 转染试剂准备:根据实验需求选择合适的转染试剂,并按照说明书进行准备。
3. 质粒准备:提取含有目的基因的质粒,确保其质量和浓度符合转染要求。
4. 转染操作:将质粒与转染试剂混合,加入到细胞培养体系中,按照特定的条件进行转染。
5. 检测表达:在转染后的适当时间点,通过各种方法检测目的蛋白的表达情况,如 Western blot、免疫荧光等。
四、瞬转的应用
1. 基因功能研究:用于快速验证特定基因的功能,观察其对细胞行为和表型的影响。
2. 蛋白质生产:在短时间内获得大量目的蛋白,用于结构分析、功能研究或药物筛选等。
3. 细胞信号通路研究:通过瞬转特定的基因或突变体,研究细胞信号转导途径。