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Masson 染色是结缔组织染色中*经典的一种方法,又称马松染色,是显示组织中纤维的主要方法之一,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关,分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而,淡绿或苯胺蓝的分子量都很大,因此 Masson 染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
一、染色原理
Masson 三色染色方法,是胶原纤维和肌纤维的染色方法,能够对组织和病理组织进行胶原结构的观察。
而 Van Gieson 染色是利用两种阴离子染料混合或先或后作用而完成鉴别染色,使胶原纤维呈红色(被丽春红所染)肌纤维呈黄色(被苦味酸所染)。
弹力纤维与胶原纤维染色选用维多利亚蓝、丽春红和苦味酸组合双重染色方法使弹力纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。
2、染色流程
1脱蜡:65度30分钟,二甲苯脱蜡 5min×2次
2水化:将脱蜡后的切片经100%酒精,95%酒精,85%酒精,75%酒精,双蒸水各3min
3温热水漂洗:30-40℃温热水漂洗,每次30-60秒,共两次。(可以分两缸温热水进行漂洗,直至玻片上除样本以外,其余部分均没有颗粒状水珠为止。)
4 染色前先用蒸馏水润湿玻片30~60秒。
5 R1核染液(试剂盒提供)染色60s左右,倒丢,冲洗液冲洗30s左右。
6 R2浆染液(试剂盒提供)染色30-60s,倒丢,冲洗液冲洗30s左右。
7 R3黄色分色液(试剂盒提供)分色6-8min左右(镜下观察样本中胶原纤维部分褪成淡粉红色为宜。如果褪色效果不佳,可适当延长时间,使得胶原纤维更易着色)。弃去分色液,(注意不需冲洗)。
8 直接用R4蓝色复染液(试剂盒提供)染色5min左右,倒丢,用无水乙醇冲洗干净。
9 放入烘箱(50-60摄氏度)烘干,中性树胶封片。
三、应用领域
1. 病理学研究:帮助病理学家准确判断疾病的类型和严重程度,尤其是在涉及到组织纤维化、肿瘤等疾病的诊断中具有重要价值。
2. 医学科研:用于研究各种疾病状态下组织的结构和功能变化,为疾病的发病机制研究提供重要线索。
总之,马松染色在组织学研究和医学诊断中发挥着重要作用。
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