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简单介绍:
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)实验是一种用于分离和纯化特定蛋白质的技术。
详情介绍:
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)实验是一种用于分离和纯化特定蛋白质的技术。
一、基本原理
利用抗体与目标蛋白的特异性结合,将目标蛋白从复杂的混合物中沉淀出来。通常将抗体与固相载体(如 Protein A/G 珠子)结合,然后加入含有目标蛋白的样品,抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物,通过离心等方法将免疫复合物沉淀下来,从而分离出目标蛋白。
二、主要步骤
1. 抗体与固相载体结合:将特异性抗体与 Protein A/G 珠子等固相载体在适当的缓冲液中孵育,使抗体结合到固相载体上。
2. 样品处理:准备含有目标蛋白的样品,如细胞裂解液等。可以对样品进行预处理,如去除杂质、调整浓度等。
3. 免疫沉淀反应:将结合了抗体的固相载体加入样品中,在适当的条件下孵育,使抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。
4. 洗涤:通过离心等方法收集免疫复合物,然后用洗涤缓冲液多次洗涤,去除非特异性结合的蛋白质等杂质。
5. 洗脱:用适当的洗脱液将目标蛋白从免疫复合物中洗脱下来,得到纯化的目标蛋白。
6. 分析:可以通过 Western Blot、质谱等方法对洗脱下来的目标蛋白进行分析和鉴定。
三、实验注意事项
1. 抗体选择:选择特异性高、亲和力强的抗体是实验成功的关键。可以通过预实验确定抗体的有效性。
2. 样品准备:样品的处理要恰当,避免蛋白质降解和非特异性结合。可以根据需要加入蛋白酶抑制剂、调整离子强度等。
3. 对照设置:设置合适的对照实验,如使用正常 IgG 作为阴性对照,以验证实验的特异性。
4. 洗涤条件:洗涤要充分,但不能过于剧烈,以免损失目标蛋白或破坏免疫复合物。
一、基本原理
利用抗体与目标蛋白的特异性结合,将目标蛋白从复杂的混合物中沉淀出来。通常将抗体与固相载体(如 Protein A/G 珠子)结合,然后加入含有目标蛋白的样品,抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物,通过离心等方法将免疫复合物沉淀下来,从而分离出目标蛋白。
二、主要步骤
1. 抗体与固相载体结合:将特异性抗体与 Protein A/G 珠子等固相载体在适当的缓冲液中孵育,使抗体结合到固相载体上。
2. 样品处理:准备含有目标蛋白的样品,如细胞裂解液等。可以对样品进行预处理,如去除杂质、调整浓度等。
3. 免疫沉淀反应:将结合了抗体的固相载体加入样品中,在适当的条件下孵育,使抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。
4. 洗涤:通过离心等方法收集免疫复合物,然后用洗涤缓冲液多次洗涤,去除非特异性结合的蛋白质等杂质。
5. 洗脱:用适当的洗脱液将目标蛋白从免疫复合物中洗脱下来,得到纯化的目标蛋白。
6. 分析:可以通过 Western Blot、质谱等方法对洗脱下来的目标蛋白进行分析和鉴定。
三、实验注意事项
1. 抗体选择:选择特异性高、亲和力强的抗体是实验成功的关键。可以通过预实验确定抗体的有效性。
2. 样品准备:样品的处理要恰当,避免蛋白质降解和非特异性结合。可以根据需要加入蛋白酶抑制剂、调整离子强度等。
3. 对照设置:设置合适的对照实验,如使用正常 IgG 作为阴性对照,以验证实验的特异性。
4. 洗涤条件:洗涤要充分,但不能过于剧烈,以免损失目标蛋白或破坏免疫复合物。
5. 洗脱条件:选择合适的洗脱液和洗脱方法,确保目标蛋白能够有效地从免疫复合物中洗脱下来,同时尽量减少非特异性洗脱。
四、达为科实验服务
分子实验平台:高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。
基因组学平台:可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。
蛋白组学平台:能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。
病理学平台:涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。
生物信息学分析:文本挖掘,芯片表达谱分析,序列分析,转录因子靶点预测,高通量测序数据分析等项目
临床前CRO服务:主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务,包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。
项目转化服务:助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化,解决客户对实验技术平台、专业人才、zhuanli申请和融资的需求;
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