产品名称：CO-IP实验外包

Co-IP

一、服务介绍

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档，已成为研究蛋白质相互作用的经典方法。

二、免疫共沉淀实验原理

当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的很多蛋白质-蛋白质见的相互作用被保留下来。如果以细胞中某蛋白质为抗原，加入相应抗体，那么该抗体就能与抗原，以及与该抗原具有相互作用的蛋白质之间形成免疫复合物，一起沉淀下来。经过SDS-PAGE电泳，western blot和（或）质谱可鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。

三、免疫共沉淀实验流程

1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，后一次吸干PBS；

2. 按比例加入适量预冷的RIPA 缓冲液；

3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5EP管中，4°C，缓慢晃动（EP管插冰上，置水平摇床上）；

4. 4°C离心后，立即将上清转移到一个新的离心管中；

5. 准备Protein A agarose，用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠；

6. 按比例加入Protein A琼脂糖珠（50%），4℃摇晃10min（EP管插冰上，置水平摇床上），以去除非特异性杂蛋白，降低背景；

7. 4°C离心后，将上清转移到一个新的离心管中，去除Protein A珠子；

8.用BCA法测定蛋白浓度，测前将总蛋白至少稀释1：10倍以上，以减少细胞裂解液中去垢剂的影响（定量，分装后，可以在-20℃保存一个月）；

9. 用PBS将总蛋白稀释到合适浓度；

10. 加入体积的预先稀释的一抗；

11. 4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h，激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h室温孵育；

12. 加入Protein A琼脂糖珠来捕捉抗原抗体复合物，4°C缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温1h；

13.瞬时离心5s，收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，去上清，用预冷的洗液（或PBS）洗3遍；

14. 将上样样品煮5min，以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃，留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性。

客户提供：

1、新鲜的样本材料（组织、细胞或蛋白溶液）

2、免疫沉淀的抗体（或由公司代购）及待测蛋白的相关信息

3、用于western blot的一抗

交付内容： 

实验报告：详细实验步骤、图片等。

服务列表

项目	备注	周期
Co-IP	含一个阳性蛋白和一个阴性蛋白检测	20个工作日
Western blot	包括蛋白提取，每张膜按8个样计算（其他三个为marker，阳性对照，阴性对照）	5个工作日

四、达为科实验服务

分子实验平台：高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。

基因组学平台：可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。

蛋白组学平台：能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。

病理学平台：涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。

生物信息学分析：文本挖掘，芯片表达谱分析，序列分析，转录因子靶点预测，高通量测序数据分析等项目

临床前CRO服务：主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务，包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。

项目转化服务：助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化，解决客户对实验技术平台、专业人才、zhuanli申请和融资的需求；

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