智启医学新维度
服务电话： 180-1784-7121（微信同号）
产品详情
简单介绍：
详情介绍：
在 Western Blot 实验中，需要注意以下细节：
一、样品制备
1. 确保样品处理过程中避免蛋白质降解，可加入适当的蛋白酶抑制剂。
2. 准确测定蛋白质浓度，以保证上样量的一致性。
二、电泳
1. 配制凝胶时要确保浓度准确，避免出现凝胶不均匀或漏胶的情况。
2. 上样时要小心操作，避免样品溢出或交叉污染，同时记录好上样顺序。
3. 电泳过程中保持电压稳定，防止条带变形。
三、转膜
1. 根据蛋白质大小选择合适的转膜条件，如转膜时间、电流或电压。
2. 确保转膜过程中膜与凝胶紧密贴合，避免产生气泡影响转膜效率。
四、封闭
1. 选择合适的封闭液，封闭时间要足够，以充分封闭非特异性结合位点。
2. 封闭后要充分洗涤，去除未结合的封闭液。
五、抗体孵育
1. 一抗和二抗的稀释比例要适当，可通过预实验确定*佳稀释度。
2. 抗体孵育时间和温度要控制好，一般在 4℃过夜或室温孵育一定时间。
3. 孵育过程中要防止抗体干燥，可使用保鲜膜或湿盒。
六、检测
1. 根据标记物选择合适的检测方法，如化学发光法或显色法。
2. 检测过程中要注意曝光时间和信号强度，避免过度曝光或信号太弱。
七、其他
1. 整个实验过程中要注意保持操作环境的清洁，避免污染。
2. 实验中使用的试剂要新鲜，避免使用过期试剂。
3. 做好实验记录，包括实验条件、结果等，以便后续分析和重复实验。
一、样品制备
1. 确保样品处理过程中避免蛋白质降解，可加入适当的蛋白酶抑制剂。
2. 准确测定蛋白质浓度，以保证上样量的一致性。
二、电泳
1. 配制凝胶时要确保浓度准确，避免出现凝胶不均匀或漏胶的情况。
2. 上样时要小心操作，避免样品溢出或交叉污染，同时记录好上样顺序。
3. 电泳过程中保持电压稳定，防止条带变形。
三、转膜
1. 根据蛋白质大小选择合适的转膜条件，如转膜时间、电流或电压。
2. 确保转膜过程中膜与凝胶紧密贴合，避免产生气泡影响转膜效率。
四、封闭
1. 选择合适的封闭液，封闭时间要足够，以充分封闭非特异性结合位点。
2. 封闭后要充分洗涤，去除未结合的封闭液。
五、抗体孵育
1. 一抗和二抗的稀释比例要适当，可通过预实验确定*佳稀释度。
2. 抗体孵育时间和温度要控制好，一般在 4℃过夜或室温孵育一定时间。
3. 孵育过程中要防止抗体干燥，可使用保鲜膜或湿盒。
六、检测
1. 根据标记物选择合适的检测方法，如化学发光法或显色法。
2. 检测过程中要注意曝光时间和信号强度，避免过度曝光或信号太弱。
七、其他
1. 整个实验过程中要注意保持操作环境的清洁，避免污染。
2. 实验中使用的试剂要新鲜，避免使用过期试剂。
3. 做好实验记录，包括实验条件、结果等，以便后续分析和重复实验。
