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蛋白质免疫(Western Blot,WB)印迹实验,这是一种广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫学等领域的实验技术。
一、基本原理
Western Blot 通过电泳将蛋白质分离,然后将分离后的蛋白质从凝胶转移到固相载体(如硝酸纤维素膜或 PVDF 膜)上。接着,利用特异性抗体与目的蛋白结合,再通过标记的二抗进行检测,以确定目的蛋白的存在、大小和相对丰度。
二、主要步骤
1. 样品制备:提取含有目标蛋白的组织或细胞样品,进行裂解、匀浆等处理,制备成蛋白质溶液。
2. 电泳分离:将蛋白质样品进行 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳),根据蛋白质的分子量大小进行分离。
3. 转膜:将凝胶中的蛋白质转移到膜上,常用的转膜方法有湿转和半干转。
4. 封闭:用封闭液封闭膜上的非特异性结合位点,以减少背景干扰。
5. 一抗孵育:加入特异性一抗,与目的蛋白结合。
6. 二抗孵育:加入标记的二抗,与一抗结合,用于检测目的蛋白。
7. 检测:通过显色或发光等方法检测目的蛋白的信号。
三、应用领域
1. 蛋白质表达分析:检测特定蛋白质在不同组织、细胞或不同处理条件下的表达水平变化。
2. 蛋白质定位研究:确定蛋白质在细胞内的定位。
3. 蛋白质相互作用研究:通过共免疫沉淀结合 Western Blot 检测蛋白质之间的相互作用。
4. 疾病诊断和研究:在医学领域,用于检测疾病相关蛋白质的表达变化,为疾病的诊断和研究提供依据。
四、实验服务
分子实验平台:高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。
基因组学平台:可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。
蛋白组学平台:能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。
病理学平台:涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。
生物信息学分析:文本挖掘,芯片表达谱分析,序列分析,转录因子靶点预测,高通量测序数据分析等项目
临床前CRO服务:主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务,包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。
项目转化服务:助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化,解决客户对实验技术平台、专业人才、zhuanli申请和融资的需求;
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