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  • 产品名称：流式细胞仪检测细胞ROS水平

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简单介绍：
 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
详情介绍：

一、流式细胞术是一种基于荧光的检测，从悬浮于溶液中的单个细胞就能同时测定多种特性

二、活性氧(Reactive oxygen species, ROS)： 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

三、实验流程

1. 从冰箱取出BBoxiProbe® O06 荧光探针，使其恢复至室温，变成液体状态后用掌上离心机离心一下，避免浪费。按照 1:1000的比例用无血清DMEM高糖培养基稀释 O06 探针；

2. 取根据分组给药处理48h过的六孔板中的细胞，把旧的培养基用移液器弃掉，用PBS润洗2次，吸净孔中液体，用0.5毫升的胰酶消化，室温条件下一分钟作用。终止消化后将细胞吹下来，尽量不要产生气泡。

3. 细胞转移到10毫升管中，配平后离心机在1000rpm条件下运行5分钟，弃上清。

4. 用1毫升 1×PBS重悬细胞，配平后离心机1000rpm运行5min，弃上清，这是要将离心管中的完全培养基以及胰酶完全洗干净。

5. 再在离心管中加入2ml稀释好的 O06 探针中，37℃培养箱内避光孵育20分钟，避光是为了防止光线照射对探针的效果产生影响。由于细胞在静置的过程中会沉积到溶液底部，导致细胞不能够与探针充分接触，所以每隔 3-5 min要拿出来颠倒混匀。20min后用离心机在1000rpm条件下运行5分钟，保留沉淀。

6. 用不含有血清的细胞培养基重悬，离心机1000转离心5min，弃上清；

7. 重复步骤6三次，这是为了将没有进入细胞内的探针洗掉，避免其影响实验结果。

用400微升无血清培养基重新将细胞吹打起来，转移到流式管中，流式细胞仪检测各组的ROS水平。

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