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实验性干眼大鼠的角结膜上皮组织学改变

摘要:外媒称,研究人员次利用基因工程对奶牛进行基因改造,使其能够抵抗结核病。牛结核病在大多数发达受到良好控制,但在发展中,这种**往往是致命的,并且会传播给人类和其他动物。

美国《新闻周刊》网站21日发表题为《中国科学家培育出抗结核病的奶牛》的报道称,来自中国西北农林科技大学的研究人员利用一种名为CRISPR的技术,对20头奶牛植入了一种与抗结核病相关的基因,其中11头牛活过了3个月。这些进行过基因改造的奶牛具有更好的抵抗结核病的能力。经过基因改造后,它们也没有表现出意料之外的症状。描述这些发现的一篇发表在131日的英国《基因组生物学》杂志上。

CRISPR是一种在过去几年里开发的基因编辑工具。和之前的技术相比,它可以快速将基因插入有机体基因组中的特定位置,并且成本较低。研究人员利用这种技术来改造许多有机体,包括在实验室里改造人类胚胎和修正老鼠体内引发杜氏肌营养不佳症的基因。

在这次的研究中,科学家们使用一种新版的CRISPR技术,将基因插入到奶牛基因组理想位置上一条DNA链的单个基因片段中。此前的CRISPR技术涉及使用分子“剪刀”来剪开DNA的两条链。宿主防御实验室的研究人员苏克·塞·德拉万表示,这种新技术的优势是它可能更为安全。该实验室隶属美国过敏症和传染病研究所。

德拉万说:“我认为这是一项非常棒的研究,证明了通过一种潜在更安全的方法来进行基因改造是可行的。”不过他认为,有进一步的研究来证明其结果的安全性。

他补充说,提高动物对感染的抵抗力可以在牲畜中大幅减少***的过度使用,后者已经是一个严重问题。

宿主防御实验室及过敏症和传染病研究所的负责人哈里·马莱克表示,培育这样的奶牛有助于减少牛奶中结核菌的传播,这是发展中的一个重大健康问题。他补充道,美国和西方大部分地区广泛使用巴氏**法,在很大程度上“消除了来自牛奶的结核病风险,尽管人们对生牛奶和奶酪的热情再度引燃了这种风险”。

美国精选公畜公司的基因项目副总裁查克·萨特勒说,研究人员已经在一些未经基因改造的牛身上发现了这种插入的基因。他表示,研究人员使用CRISPR技术作出的改变也可能在传统养殖过程中出现,只不过使用基因改造技术能够更快、更有针对性。

这种经过基因改造的奶牛要在美国获得批准,通过美国食品和**管理局的审查。萨特勒补充说,就目前而言其成本太高了。

在一项新的研究中,来自中国西北农林科技大学动物医学院的研究人员次利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功地培育出具有增加抵抗牛结核病能力的奶牛。相关研究结果于201721日发表在Genome Biology期刊上,标题为“Single Cas9 nickase induced generation of NRAMP1 knockin cattle with reduced off-target effects”。

研究人员利用一种改进的CRISPR基因编辑技术将一种新的基因插入到奶牛基因组中,而且在奶牛基因组中没有检测到脱靶效应。当利用CRISPR构建转基因动物时,脱靶效应是一个常见的问题。

通信作者、西北农林科技大学动物医学院教授、博导张涌(Yong Zhang)博士说,“我们利用一种新的被称作CRISPR/Cas9nCRISPR系统将结核抗性基因NRAMP1成功地插入到奶牛基因组中。我们随后能够成功地培育出具有增加抵抗结核病能力的奶牛。重要的是,我们发现这不会在奶牛基因组中产生脱靶效应,这意味着我们采用的这种CRISPR技术可能更好地适用于产生转基因家畜。”

鉴于CRISPR技术是一种准确地和相对容易地修饰遗传密码的方法,近年来,它已广泛地用于实验室中。然而,遗传密码的意外变化会因脱靶效应而发生,因此发现降低这些意外变化的方法是基因组学研究的要任务。

张博士解释道,“当你想要将一种新的基因插入到哺乳动物基因组中时,很难在基因组中找到佳的位点来插入这种基因。你不得不找遍整个基因组,寻找一个你认为将对附近的其他基因产生小影响的区域。我们利用一种细致的方法鉴定出适合于基因插入的区域,而且我们证实这不会在奶牛基因组中产生可检测到的脱靶效应。”

研究人员利用CRISPR/Cas9n技术将NRAMP1基因插入到来自雌性奶牛的牛胎儿成纤维细胞基因组中。随后,这些细胞在一种被称作体细胞核移植的过程中用作供体细胞。在这种体细胞核移植中,将来自携带这种新基因的供体细胞的细胞核导入到来自雌性奶牛的卵细胞中。他们在实验室中培养这些卵细胞,随后将它们转移到具有正常妊娠周期的母奶牛体内。作为对比,也利用标准的CRISPR/Cas9技术开展这些实验。

利用CRISPR技术培育出总共11只携带这种新基因的小奶牛,它们能够接受结核病抵抗性和脱靶效应评估。对这些小奶牛的基因分析结果揭示出已将NRAMP1基因成功地插入到所有小奶牛的基因组靶位点上。在利用这种新的CRISPR/Cas9n技术成功地插入NRAMP1基因的小奶牛中,没有一只小奶牛具有可检测到的脱靶效应,而之前利用CRISPR/Cas9技术成功地插入NRAMP1基因的小奶牛中,所有的小奶牛都存在脱靶效应。

当这些小奶牛接触牛结核分枝杆菌(导致牛结核病的**)时,研究人员通过测量血液样品中标准的感染标志物,发现这些转基因小奶牛表现出增加的牛结核病抵抗性。他们也发现从这些小奶牛中提取出的白细胞在实验室测试中更加抵抗牛结核分枝杆菌感染。

张博士说,“我们的研究次证实这种CRISP/Cas9n系统能够被用来构建没有可检测到的脱靶效应的转基因家畜。我们的研究已在牛基因组中发现一个有用的位点,利用这种基因编辑技术靶向这个位点可成功地插入有益于家畜的新基因。”

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