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详细内容

RNA提取注意事项


1. 实验中的一些好习惯

加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均;移液枪用完之后要归到大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性;要记着关水浴箱,切记切记;多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这是快提高的捷径了;所有的试剂都自己配,出了问题才好找原因。

2. 防止RNA酶污染的措施

1)所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间;

2)塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用);

3)有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室温10min,然后用0.1% DEPC水冲洗,晾干;

4)配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC,在37℃处理12hr以上。然后用高压**除去残留的DEPC。不能高压**的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制,然后经0.22μm滤膜过滤**;

5)操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。

6)设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用;

3. 常用的RNA酶抑制剂

1)焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性;

2)异硫氰酸胍:目前被认为是有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用;

3)氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合形成过渡态类物质,能抑制RNA酶的活性;

(4RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasinRNA酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种RNA酶结合,使其失活;

(5)其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有抑制作用。

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