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血虚证动物模型研究概况(下)

3 放射性损伤血虚证动物模型

放射性损伤是利用60Coγ射线等照射动物全身,可使动物造血干/祖细胞减少,造成白细胞数量下降和骨髓损伤,造模效果明显,但需要特殊设备,而且照射量的控制有难度,过小达不到损伤要求,过大又会造成动物死亡。

为研究辐射所致血虚证模型小鼠的发病机制,马增春以不同剂量(2.55.57.5Gy)γ射线照射,诱发不同程度的小鼠血虚证,分别检测各组小鼠指标改变情况。结果小鼠在7d左右出现不同程度的血虚征象:皮毛干燥、光泽差、懒动。形态学检查显示,照射后各剂量组小鼠的骨髓和脾脏细胞出现典型凋亡变化,以照射后24h内明显,随后逐渐减少,7d左右基本消失;照射后24h内各剂量组小鼠骨髓和脾脏细胞DNA凝胶电泳出现明显梯状带,随着时间的推移,梯状带减弱、消失;小鼠照射后6h骨髓细胞凋亡率高,5.5Gy照射组为明显;CD34+细胞在骨髓有核细胞中的比例随照射剂量加大而降低,5.5Gy照射后14d内小鼠骨髓中CD34+细胞减少表现为持续性。5.5Gy照射后小鼠骨髓细胞周期紊乱。谭洪玲等采用60Coγ射线全身1次照射,照射剂量为3.5Gy,制备血虚证模型,造模后第7天进行骨髓集落细胞培养,造模后第7天和第14天检测CD34+细胞。结果表明:模型对照组小鼠骨髓中的CFU-GMCFU-EBFU-ECFU-megCFU-mix明显减少,CD34+细胞比例亦显著减少。**方剂可显著逆转上述改变。放射线照射还可使小鼠骨髓细胞在G2/M期阻滞,导致凋亡细胞增多。

刘永学等分别采用2.55.57.5Gy的γ射线照射小鼠,观察不同辐射剂量对血虚证模型的影响。结果显示,经不同剂量射线照射后,小鼠出现不同程度的血虚证表现,外周血白细胞数明显下降,各剂量组小鼠骨髓和脾脏细胞出现典型的凋亡变化。蒲春霞等采用3.5Gy60Coγ射线全身1次照射小鼠,制备血虚证模型,结果显示,模型小鼠外周血白细胞和血小板数量显著降低,脾结节生成单位和粒系-巨噬系集落生成单位显著降低。而**方剂可程度逆转上述变化。佟丽等应用细胞因子寡核苷酸表达谱芯片检测放射线致血虚小鼠不同脏器组织内造血相关细胞因子差异表达情况。结果显示,放射线照射后不同时间点各脏器组织血虚组均有表达下调的基因,这些差异表达的细胞因子基因的功能大致分为3:促细胞生长或增殖、**调节和诱导血细胞的形成或促造血祖细胞的集落形成。实验中检测到辐照后2h参与**应答的细胞因子基因IL-2下调,6h后间接促进造血的IL-4IL-8R表达下调,提示造血系统功能开始下降,12h,促红细胞生成的PDGF-R、促GM-CSF生成的IL-18及主要造血因子G-CSF本身均下调。脾脏组织在照射后12h发现1个上调的基因IL-12b,该因子具有直接促进骨髓干细胞的增殖和形成集落作用。肾脏组织在照射后6h出现大量下调基因,其中包括c-fosc-jun原癌基因,它们均是在核中参与转录调控的基因。由此推测血虚证的形成可能在基因转录过程中就已开始。高月等比较了3.55.57.5Gy60Coγ射线照射制备的血虚证模型后得出结论:7.5Gyγ射线照射后,骨髓造血功能严重受抑,骨髓有核细胞极少,中药**方剂对其无**作用;5.5Gyγ射线照射所致的损伤,只有在动物预防给药连续7d,方能程度促进造血功能恢复;3.5Gy照射剂量是此类模型制作的佳照射剂量,便于中药**类方剂及单药的药效学评价。

4 **介导型血虚证动物模型

**介导型再生障碍性贫血模型的建立创于1967年。后来又进行了改良。梁毅等用该方法制备血虚证小鼠模型并研究了**方药对其的**作用。具体方法为:DBA/2小鼠,断颈处死,95%乙醇浸泡**后,无菌条件下取出胸腺及颈、腋下、腹股沟**结,RPMI1640培养液,除去表面血污及黏附的结缔组织后,制成单细胞悬液,细胞计数,调节细胞浓度为1×106/ml,其胸腺细胞与**结细胞比为12,并鉴定细胞活性应在95%以上。Balb/c小鼠经X射线6.0Gy/3min亚致死剂量照射后14h,立即经尾静脉输入上述细胞悬液,每只0.2ml。其机制在于Balb/c小鼠经亚致死量照射后,机体的**功能严重受损,再输入同基因H-2,Mls抗原不同的DBA/2小鼠的胸腺和**结混合细胞,这些**活性细胞在宿主体内生存,使宿主出现造血抑制细胞和血浆CFU-GM抑制活性,从而导致造血干细胞数量明显减少并出现缺陷,使自身复制的速率低于分化率,终引起全血细胞减少。实验表明,造模814d小鼠出现明显的血虚证症状体征:精神萎靡,倦卧少动,嗜睡,毛色枯黄蓬松,眼睛淡白无神,唇鼻苍白无华,耳、尾苍白而凉,团缩拱背,明显消瘦,饮水增多。并出现全血细胞显著减少、骨髓有核细胞显著下降等病理学特征。

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