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**共沉淀(CO-IP)与免疫沉淀(IP)的比较

**共沉淀(CO-IP)与**沉淀的比较

**共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:目的蛋白兴趣蛋白抗兴趣蛋白体—SPA\|Pansobin”,因为SPA\|Pansobin比较大,这样复合物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物四组分又被分开。然后经Western blotting法,用抗体检测目的蛋白是什么,是否为预测蛋白。

这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的,符合体内实际情况,得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个缺陷:一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;二是在实验前预测目的蛋白是什么,以选择后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

**沉淀反应主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下,按适当比例所形成的可见沉淀物现象。据此现象设计的沉淀实验主要包括絮状沉淀试验,环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为**扩散实验和**电泳技术2类。

**共沉淀的优点:

1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;

2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;

3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

缺点:

1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;

3)在实验前预测目的蛋白是什么,以选择后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

 4)灵敏度没有亲和色谱高。

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