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原代细胞分离技术你了解吗？
1. 悬浮细胞的分离方法
1) 将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。
2) 去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。
3) 用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。
4) 如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。
2. 实体组织材料的分离方法
1）机械分散法
a. 纤维成分较少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3的组织块。
b. 用PBS清洗两次后
①用吸管吹打，分散组织细胞。
②或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出。
③或在不锈钢纱网内用钝物（注射器钝端）压挤使细胞从网孔中压挤出。
c. 收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。
d. 去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。
2）消化分离法
酶消化分离法（过夜冷消化法）
a. 细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。
b. 再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。
c. 加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4℃过夜。
d. 次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2-3次。
e. 加入少量含血清的培养基吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。
非酶消化法（EDTA消化法）
a. 把组织块剪碎，呈1mm3大小的组织块。
b. 将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。
c. 加入消化液（胰蛋白酶或胶原酶或EDTA）于37℃水浴中作用适当时间（中间可轻摇1~2次），若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。
d. 弃去上清，加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应，并洗涤2-3次后，加入培养基。
e. 用吸管吹打，使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。
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