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细胞培养基生产和使用常见问题

细胞培养基生产和使用常见问题

1.低血清培养基能用肉眼判断其pH值吗?

答:低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的分红含量不同,不能同通过肉眼观察通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。


2.低血清培养基的缓冲系统是什么?

答:平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有Hanks’系统、Earle’s系统、Dulbecco’s磷酸缓冲盐系统等。199系列培养基、MEM系列培养基均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。但是有些培养基均不是以上常规的平衡盐系统,例如RPMI 1640培养基、F12培养基。MEM(SLM)低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统,该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。


3.谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么?

答:以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制为例:称取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分搅拌混匀。用0.2μm滤膜正压过滤**。溶液应在4℃下避光保存,2周内使用。

以7.5% NaHCO3的配制为例:称取NaHCO37.5g溶于100ml蒸馏水中过滤**。


4.什么培养基中可以省去加酚红?

答:酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻。 酚红并不是培养基中的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。


5.放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化,为什么?

答:培养基保存于4°C 冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果, 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时, 可以通入无菌过滤之CO2, 以调整pH 值。


6.无血清培养与有血清培养使用的***量一样吗?

答:当在无血清培养基中添加***时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些***。在无血清培养条件下,***不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。


7.培养基中添加了血清和***后,可长期保存吗?

答:一旦您在新鲜培养基中添加了血清和***时,您应该在两到三周内使用它。因为一些***和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。


8.什么是个性化培养基?它有什么优点?

答:根据细胞类型、培养方式和生产工艺等特点所定制的培养基,即个性化培养基。个性化培养基在国外生物制药企业被普遍采用,个性化培养基可以为细胞生长提供充足的营养物质,能提高细胞的生长速率、培养密度、以及延长细胞维持时间;也可以为细胞生长提供均衡的营养供给,减少细胞有害代谢物质的积累,降低对细胞生长的危害;同时对贴壁细胞而言,能增加细胞的贴壁性,并降低培养过程中剪切力对细胞的损伤;个性化培养基可以根据各户的特殊需求减少或不使用动物源成分,从而使生物制品安全性更有保障。


9.细胞培养基偶然被冻,可否继续使用?

答:如果细胞培养基偶然被冻,您应该自然溶解培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。


10.细胞冷冻培养基之成份为何?

答:动物细胞冷冻保存时常使用的冷冻培养基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中, 使用前先行配制完成。


11.培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗?

答:大部分添加物和试剂多可以冻融3次,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。


12.液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?

答:要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月到一年。

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