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细胞培养技巧汇总-上海达为科告诉你

细胞培养技巧汇总-上海达为科告诉你

1、细胞复苏和冻存遵循“慢冻快融”,复苏细胞时尽可能短时间内使凝固的细胞冻存液融化,37度水浴箱中快速摇晃。

2、冻存细胞时每个冻存管的冻存液不要超过1ml,过多的冻存液会使细胞复苏时不易融化和融化时间过长。冻存液过多过满时,在冻存液凝固时体积膨胀,易使冻存管撑开。

3、冻存时,冻存管盖子千万拧紧,否则冻存管内进入液氮。待复苏时,冻存管内液氮受热迅速挥发膨胀,导致冻存管爆炸(血的教训)。

4、融化冻存的细胞后,转到15ml离心管中,向离心管中缓慢滴加新鲜的培养基,使细胞内的DMSO从细胞中释放出来。

5、DMSO有毒,且易被皮肤吸收,做好防护措施。DMSO本身抑菌,不会长菌,切记打开DMSO瓶盖时勿使用本生灯对瓶口**,否则极易使瓶口的DMSO挥发导致整个细胞房充满了DMSO的毒气。

6、刚复苏的细胞很脆弱,吹打时动作轻柔。冰箱中拿出的培养基可以预先在培养箱中复温再使用。

7、DMSO对细胞有毒性,细胞复苏后,待细胞贴壁或第二天更换新鲜培养基,同时去除死细胞。

8、细胞传代、铺板,各种规格培养皿参数

9、对于容易聚团和粘附的细胞,刚刚铺均匀,摇晃两下就发现细胞又聚成一团一团。应对方法:用1ml枪反复吹打细胞,吹均匀后立刻放入培养箱,不要摇晃也不要观察,减少细胞晃动相互接触。

10、细胞状态不好了,怎么调整都没有用,可以先将细胞进行冻存后再复苏,细胞会好很多,同时也会死很多,这叫优胜劣汰,适者生存,存活下来的都是优良的种子。

11、细胞一旦污染,坚决扔掉,重新复苏新的细胞,没有什么可以挽救细胞,包括***(除了以下情况)。

12、细胞如果污染了,并且没有冻存的细胞,且非常珍贵,如何挽回?将培养的细胞接种于裸鼠皮下,并成瘤,将瘤组织再重新剪碎消化后培养到培养皿中培养,由于裸鼠具有的**力,可以抵抗**感染,重新培养的瘤细胞则是无菌的,前提是该细胞能在裸鼠皮下成瘤。(原来裸鼠还有这个功能!)

13、冻存细胞时冻存液7:2:1,也可以5:4:1,血清****。冻存时遵守梯度降温,缓慢降温,可以使用梯度降温盒,使用前将冻存盒复温。没有冻存盒可以4度放置20min, -20度放置20min, -80度过夜后移致液氮中。

14、细胞培养三条原则:1、维持营养:不能长时间不换液不传代,细胞不能过密过多 2、避免污染:防止**,**,支原体污染,遵守无菌原则 3、防止消化过度:显微镜下观察并控制消化情况。

15、各种培养试剂建议分装个人使用,发现污染,可以毫不心疼的扔掉,同时可以避免交叉污染。

16、细胞培养箱上面的3个参数, CO2、水、温度。一个出了问题都会导致细胞毁灭性的打击,建议每次检查下是否正常。

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