主营产品:
动物实验动物实验外包科研实验外包上海动物实验水迷宫实验外包动物实验外包公司动物造模动物模型构建动物行为学实验细胞实验细胞实验外包细胞培养实验细胞周期实验细胞增殖检测细胞凋亡检测
产品与服务

上海达为科生物科技有限公司

电话:021-55130726

传真:021-55130728

联系人:张艳

电话:18017844061

邮箱:jierdun@jrdbio.com

地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B638室  



详细内容

细胞FISH新技术

细胞FISH新技术

TALEN是一个被人们广为接受的基因组编辑技术。现在,科学家们在TALEN的基础上开发了一个新技术,该技术也可以在活细胞中监控染色体的动态。

当研究者们想知道特定核酸序列在细胞中的位置时,他们一般会进行荧光原位杂交FISH。该技术利用荧光标记的互补探针与目的链杂交,在细胞内黑暗的背景中生成一个亮点。不过FISH技术需要固定,不能在活细胞中研究染色体的动态。

日前,两个相互独立的团队分别在Nucleic Acid Research和Nature Structural & Molecular Biology杂志上发表文章描述了一种新方法,该方法可以利用转录激活因子样效应物TALE在活细胞中标记基因组DNA。这两个团队分别由德国慕尼黑大学的Heinrich Leonhardt教授,和法国IGBMC的Maria-Elena Torres-Padilla领导。

TALE的DNA结合域由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成,每个模块负责靶向一个DNA碱基。在这些模体中,主要由两个核心氨基酸决定TALE的特异性识别。研究者们可以根据目的DNA的序列,设计特定的模体组合,进而构建能够与基因组区域结合的蛋白。

Leonhardt和Torres-Padilla将TALE与荧光蛋白偶联起来,对近着丝粒区域的重复序列(主要卫星重复序列)进行靶标。他们在小鼠的胚胎干细胞中表达这个蛋白,并通过荧光成像在整个细胞周期中跟踪上述染色体区域。

Torres-Padilla将她的技术称为TGV(TALE介导的基因组可视化技术),Leonhardt并没有给自己的方案命名,只是说这一技术“类似于活细胞FISH。”

作为一种活细胞技术,这种新方案可以用于检测细胞中的分子动态。Leonhardt通过光漂白-恢复实验向人们展示,他构建的TALE片段可以的与目标稳定结合几分钟。

Torres-Padilla及其团队将自己构建的TALE片段插入了小鼠的受精卵,并在早期胚胎发育的过程中跟踪蛋白的表达情况。此外,她的团队还构建了靶标端粒和次要卫星重复序列的TALE片段,并且通过双色成像同时检测了这两种序列。

据Leonhardt介绍,新研究为人们提供了一个研究基因组结构和组织形式的重要工具,可以帮助人们揭示此前难以监控的表观遗传学控制。

他解释道,过去人们曾经认为“细胞核中的DNA可以自由活动,就像一碗汤面一样没有什么规则可言。现在越来越多的证据表明事实并非如此。基因组在细胞核内的组织形式是高度复杂的,是对基因组活性的额外调控。”

梅约诊所的Stephen Ekker教授一直在自己的研究中使用TALEN技术。他指出,这两项新研究为人们提供了一个“全新的细胞生物学研究工具。”理论上这一技术可以靶标基因组序列。举例来说,研究者们可以在发育或肿瘤发生过程中,实时研究特定染色体区域的运动。

“从实用性的角度来看,这一技术可以帮助人们解决一些细胞生物学研究的难题。我对此很感兴趣。”Ekker教授说。

Copyright@ 2003-2020  上海达为科生物科技有限公司版权所有      电话:0756-2183150 传真: 地址: 邮编:
         沪ICP备15041491号     

沪公网安备 31011302004470号