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**共沉淀(Co-IP)原理及步骤

**共沉淀(Co-IP)原理及步骤

**共沉淀(Co-IP)原理及步骤:实验材料:蛋白质

                 试剂、试剂盒:RIPA Buffer  PBS  Protein A  agarose  琼脂糖  还有考马斯亮蓝染色液

                 仪器、耗材: 离心机 摇床 EP管 细胞刮子 离心管 培养板 电泳仪 电泳槽 高效液相色谱仪

**共沉淀(Co-IP)原理及步骤:实验步骤

一、试剂准备

1.预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机。

2.用预冷的PBS洗涤两次细胞,终一次吸干PBS。

3.加入预冷的RIPA Buffer(1 ml/107个细胞、10 cm培养皿或150 cm2培养瓶,0.5 ml/5×106个细胞、6 cm培养皿、75 cm2培养瓶)。

4.用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下,把悬液转到1.5EP管中,4℃,缓慢晃动15 min(EP管插冰上,置水平摇床上)。

**共沉淀(Co-IP)原理及步骤其原理是:当细胞在不是变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的很多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保存了下来。比如用蛋白质X的抗体**沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的proreinA就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。



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