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基因组DNA提取方法


基因组DNA提取方法

上海基尔顿生物主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。基因组DNA提取方法,一般情况下要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中好避免使DNA断裂和降解的各种因素,以DNA的完整性,为接下来的实验打下基础。主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。化学方式:异硫氰酸胍法,碱裂解法生物方式:酶法。依据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等。

试验步骤:

1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液,混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相

6、用等体积的,异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

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