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乙型肝炎病毒cccDNA检测方法及应用价值
在乙肝病毒的复制过程中，病毒DNA进入宿主细胞核，在DNA聚合酶的作用下，两条链的缺口均被补齐，形成超螺旋的共价、闭合、环状DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。细胞外乙型肝炎病毒DNA是一种松弛环状的双链DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子。cccDNA是乙肝病毒前基因组RNA复制的原始模板，虽然其含量较少，每个肝细胞内只有约5～50个拷贝，但对乙肝病毒的复制以及感染状态的建立具有十分重要的意义，只有**了细胞核内的cccDNA，才能消除乙肝患者病毒携带状态，是抗病毒**的目标。
细胞外乙型肝炎病毒DNA是一种松弛环状的双链DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子，其两条链均不是闭合的，其中负链较长，约3200个碱基，含有乙肝病毒基因组的全长基因，在其5’起始端与3’末端之间有一个数个碱基的“缺刻”(nick)；正链较短，有较大的“缺口”(gap)，其3’末端不固定，故长度是可变的，约为负链长度的50%～。在乙肝病毒的复制过程中，病毒DNA进入宿主细胞核，在DNA聚合酶的作用下，两条链的缺口均被补齐，形成超螺旋的共价、闭合、环状DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。cccDNA是乙肝病毒前基因组RNA复制的原始模板，虽然其含量较少，每个肝细胞内只有约5～50个拷贝，但对乙肝病毒的复制以及感染状态的建立具有十分重要的意义，只有**了细胞核内的cccDNA，才能消除乙肝患者病毒携带状态，是抗病毒**的目标。
cccDNA和rcDNA在结构和理化特性上有三点不同：①rcDNA在正链与负链上均有缺口或缺刻，只是部分区域互补故能形成环状结构，但非超螺旋结构；而cccDNA两条链均是完整的，二者共价互补，形成超螺旋结构。②rcDNA能与蛋白质共价结合，cccDNA则不能。③由于缺口或缺刻的存在，rcDNA可以被一些核酸酶如外切核酸酶Ⅲ(exonuclease Ⅲ)、绿豆核酸酶(mung beannuclease)等降解成寡核苷酸或单核苷酸，而cccDNA则由于是超螺旋且双链结构均是完整的，一般不会被上述酶降解。上述差异是设计和建立cccDNA检测技术的基础。
