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实验动物常用的处死方法

安乐死是英文单词Euthanasia的中译,Euthanasia一词来源于古希腊语,意思是美好的死亡、快乐的死亡、无痛苦的死亡。日本学者将Euthanasia翻译为安乐死,这一译称为中国学者所接受。实施安乐死一般遵循以下原则:①尽量减少动物的痛苦,尽量避免动物产生惊恐、挣扎、喊叫。②注意实验人员安全,特别是在使用挥发性麻醉剂(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)时,要远离火源。③方法容易操作。④不能影响动物的实验结果。⑤尽可能缩短致死时间,即安乐死从开始到动物意识消失的时间。⑥判定动物是否被安乐死,不仅要看动物呼吸是否停止,而且要看神经反射、肌肉松弛等状况。

1物理方法致死

1.1急性失血法

此法应用于大鼠和小鼠等小动物时,常是剪断动物的股动脉,放血致死。可以采用摘眼球法,在鼠右侧或左侧眼球根部将眼球摘去,使其大量失血致死。如果是犬、猫或兔等稍大型动物应先使动物麻醉、暴露股三角区或腹腔,再切断股动脉或腹主动脉,迅速放血。动物在35 min内即可死亡。采用急性失血法动物十分安静,对动物的脏器无损害,但器官贫血比较明显,若采集组织标本制作病理切片时可用此法。

1.2断头法

此法适用于鼠类等小动物,可用直剪刀,也可用断头器。断头法处死动物时间短,并且脏器含血量少,若需采集新鲜脏器标本可采用此法。断头**引起血液循环的突然中断和血压的迅速下降并伴随意识的消失,只能用于恒温动物。对于变温脊椎动物不推荐用断头法,因为它们相对能更高的抵制缺氧。

1.3空气栓塞法

当空气注入静脉后,可阻塞其分支,进入心脏冠状动脉可造成冠状动脉阻塞,发生严重的血液循环障碍,动物很快死亡。此法适用于较大动物的处死,家兔、猫用此法需注入2040 mL空气,犬致死的空气剂量为80150 mL。由于应用此法后,动物死于急性循环衰竭,所以各脏器淤血十分明显。

1.4断髓法

此法适用于小鼠、大鼠等小动物。用于家兔时可敲击延髓致死,用木锤用力锤动物的后脑部,破坏延脑,动物痉挛后死亡,简单迅速。用于蟾蜍、蛙类可直接捣毁脊髓,将金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓使动物死亡,操作过程中要防止毒腺分泌物射入实验者眼内。

2化学**致死

常用安乐死**有:吸入式麻醉剂(包括CO2CO、乙醚、三氯甲烷等)、氯化钾、***类麻醉剂、二氯二苯三氯乙(DDT)等。

2.1**吸入

**吸入致动物死亡适用于啮齿类,如小鼠、大鼠、豚鼠等小动物,操作简单,是实验中安乐死的常用方法。因CO2无毒,制备方便,效果,是常用的致死**。对1日龄的雏鸡研究表明,CO2是有效的安乐死试剂,它不引起痛苦,抑制神经紧张活动,在5 min之内引起动物的死亡。CO2浓度越高,动物失去意识的时间就越短。当CO2浓度增长缓慢时,也会延长动物失去意识的时间。可以采用特制的安乐死箱,能使CO2气体充满整个箱室,麻醉致死效果和人员安全。

2.2**注射

**注射是通过将**注射到动物体内,使动物致死。这种方法适用于较大的动物,如兔、猫、犬等。

氯化钾适用于家兔和犬,可采用静脉注射的方式。高浓度的钾可使心肌失去收缩能力,心脏急性扩张,致心脏迟缓性停跳而死亡。实验证明注射氯化钾后细胞损伤严重,线粒体肿胀很明显,嵴模糊不清,细胞核明显异常。家兔和犬的致死量分别为10%氯化钾5102030 mL

***类麻醉剂适用于兔、豚鼠,用药量为深麻醉剂量的25倍左右。一般用量为90 mg/kg,约15 min内死亡。该类**能抑制丙酸氧化酶系统,从而抑制**神经系统(特别对大脑皮质及下丘脑),使反射机能逐渐消失。也有人称用麻醉方法处死实验动物不应称为安乐死,这是按照设定程序将其适时处死,选用了无痛方法,在应用上还存在争议。

DDT适用于豚鼠、兔、犬。豚鼠致死量为3.04.4 mg/kg,家兔为0.51.0 mg/kg,犬为0.30.42 mg/kg。豚鼠皮下注射,家兔和犬静脉注射。其机理可能与DDT 损伤细胞修复和**抑制有关,并能诱导肝微粒体酶系统,使某些酶发生抑制,而且本身经肝代谢而表现肝毒性作用。

3特殊实验动物的处死

处死昆虫一般用烫死法,快速,可避免昆虫挣扎或人的抓捏而造成虫体的损伤。很多直翅目昆虫的腿可能会因剧烈的抽搐而脱落,可在制作昆虫标本时用万能胶粘上去,不会影响虫体的完整和美观。处死青蛙时可用酒精麻醉,用镊子夹取一浸透95%酒精的棉球,塞入青蛙口腔中,三四分钟后,青蛙便瘫倒不动,效果优良。也可用香烟麻醉,向装有青蛙的瓶里吹几口烟,盖紧瓶盖,几分钟后,青蛙瘫倒不动。狐的处死方法为将人用氯化琥珀酞胆碱针剂1支(2 L,内含100 mg)稀释100倍,注入其心脏中,狐在1060 s内昏迷,47 min内死亡,昏迷后即可取皮。

随着时代的进步与发展,科学工作者在从事生命科学研究时,对待实验动物,越来越考虑到动物福利的问题。动物福利是社会进步和经济发展到阶段的必然产物,体现了人与动物协调发展的趋势。应爱护和善待实验动物,树立人性化的实验精神。这样不仅能实验动物的质量,实验结果的可靠性和准确性,还能培养良好的临床心理,实现人性化的实验与教学。

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