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在磁珠分选细胞实验中应注意事项

**磁珠法分离细胞原理:

是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场当中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,而无该种表面抗原的细胞由于不能与链接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁场,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。

磁珠分选细胞实验中应注意事项:

1、待分选细胞中如有贴壁细胞,建议在分选前先贴壁培养去除,或者提高EDTA浓度。

2、抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞。

3、新鲜分离骨髓细胞,先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化,可使细胞团块解聚,从而提高分离效率。

4、上分离柱前,充分振荡,混悬细胞,打散细胞团块。

5、用分离柱分选,应用真空抽滤水,减少水中气泡,使分离柱不被气泡阻滞。

6、细胞悬液加入分离柱中时,应将滴管伸至底壁后加入,避免将细悬液沿管壁流入,使管壁残流末分选细胞,以致后继洗柱过程中,因疏忽末被洗下,后导致纯度不高。洗柱时,应在前次液体充分流尽后,再加洗液。

7、分选细胞量应根据说明书控制,不超量。

8、孵育时间和温度应按说明书进行,延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。

9、先用抗体阻断Fc受体,可降低非特异性结合。

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