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甲基化分析
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达为科优势
  • 质量保证:可避免样本偏差,在重亚硫酸盐转化步骤后得到更高的定量结果的数据质量;引物设计运算法专为甲基化研究而优化,可提供更快的引物设计,及更高的PCR成功率
  • 可以提供整个CpG岛的每个CpG位点的甲基化信息
  • 针对特定区域设计引物,而无需考虑甲基化状态
原理
DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是蕞主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的2-7%。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。
我们利用重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而在适当的实验条件下甲基化的胞嘧啶保持不变,再进行PCR扩增,甲基化的位点可以被当作一个C/T的SNP来处理;可利用直接测序法来判断是否CpG位点发生甲基化。
服务流程
  • 客户提供:待分析的基因组区域信息;用于提取基因组DNA的组织材料
  • 基因组DNA的提取,利用琼脂糖凝胶电泳明确所提基因组DNA的纯度
  • 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA:双链DNA变性解链后,在HSO3-作用下,C若已有甲基化则无此改变;若DNA CpG岛若无甲基化,则序列中的改变为C→U,CG→UG
  • 修饰后DNA纯化回收,并进行引物特异性的PCR
  • 对PCR产物进行测序并且与未经处理的序列比较
  • 我们提供:特异性位点的DNA甲基化的检测结果
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