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TUNEL检测
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TUNEL检测:TUNEL是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法。如果您对我们的TUNEL检测感兴趣或有疑问,欢迎来电咨询。

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    TUNEL检测

一、服务介绍

细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。凋亡是多基因严格控制的过程。

二、TUNEL检测实验原理

TUNEL检测terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法),也称DNA断裂的原位末端标记法。细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段,然后大约30%的染色体DNACa2+Mg2+依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180200 bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA3’-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA3’-末端,再用辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与衍生物上生物素结合(每个链霉亲和素至少可以再结合3个生物素分子),后用DAB、过氧化氢与辣根过氧化物酶发生氧化、环化反应,形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色,终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。由于正常的或正在增殖的细胞没有DNA的断裂,因而没有3’-OH形成,很少能够被染色。

三、TUNEL检测实验流程

1、收集处理后的细胞或石蜡切片脱蜡至水。

2、过氧化氢甲醇中浸洗,抑制内源性过氧化氢酶。

3、用蛋白酶K室温孵育15~30分钟。

4、滴加TUNEL反应混合液(即配即用,4oC避光),孵育60分钟,在荧光镜下(绿色)分析结果。

5、加入转化剂-POD,孵育20~30 min

6、加入DAB底物溶液,孵育5~10 min

8、中性树胶或者甘油封片,光镜下分析结果。

  

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