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激光共聚焦
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激光共聚焦:荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。如果您对我们的激光共聚焦感兴趣或有疑问,欢迎来电咨询。

激光共聚焦
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激光共聚焦

     激光共聚焦

激光共聚焦:聚焦显微技术(Confocal microscopy)是通过激光扫描共聚焦显微镜来获取细胞内某个薄层面上的荧光信息, 并结合计算机自动控制和信息收集功能,对荧光信号的分布、强度和动态变化进行较好的的分析和整合, 从而得到丰富的细胞信息。 消除了聚焦平面以外的荧光信号的干扰, 故成像清晰。可以对样品不同层面进行连续逐层扫描, 再由计算机将这些图形重组为三维图像,图形清晰度高、层次分明、立体感更强。可对细胞某个选定结构进行长度和体积的测量, 在分析细胞空间结构和某些物质的胞内定位方面具有明显的优势,可同时实现多重指标的检测。目前,该技术应用范围已扩展到细胞学、微生物学、发育生物学、遗传学、神经生物学、生理和病理学等学科,成为现代生物学微观研究的重要工具。

激光共聚焦实验前的步骤

1、做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了),注意:洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛要新鲜配制的(一周以内的都能用), 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后,都会有自发荧光。

2、抗体的孵育:预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度,一抗4度孵育过夜(时间8~12h);二抗(荧光抗体)孵育时要避光,孵育好后用PBS充分冲洗;可以将做好的片子直接在板子中孵育,如果从节约的角度来看,可以用12或24孔板比较好。

3、做好以上步骤后,将板子里放点PBS,保存片子湿润,不要干片,这样会影响细胞形态。

4、到激光共聚焦观察室后,再将爬片取出,在干净的载玻片上滴一滴50%的甘油,然后将爬片取出来倒扣在滴过甘油的载玻片上(即细胞在2层玻片之间,不要反了哦;还有千万不要用中性树胶封片!

5、显微镜下观察即可


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