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iTRAQ
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iTRAQ( Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation)和TMT( Tandem Mass Tag)分别是由AB SCIEX和Thermofisher开发的、用于标记肽段并结合LC-MS实现对多个样品的蛋白质组进行相对定量的试剂盒。iTRAQ有4标和8标两种规格,TMT有2标、6标和10标等三种规格。

iTRAQ
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iTRAQ

背景简介:


iTRAQ和TMT的技术原理一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白质),iTRAQTMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量:

SILAC是通过MS( MSl)对蛋白质进行定量,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定量的;

iTRAQ/TMT能兼容所有来源的蛋白质样品,并且能同时分析多达8-10组的样品,分析通量高。

试验流程

1、分别提取蛋白质并定量;

2、Trypsin分别对蛋白进行酶解,提取肽段;

3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记:

4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);

5、对每个组分进行LC-MS分析:

6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;

7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):



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